细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology,
编辑部邮箱 , 2011年10期
 【作者】 王晓辉； 惠玲； 吕同德； 哈小琴； 王剑峰； 张军莉； 杨霄鹏；

【机构】 兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室； 兰州军区兰州总医院医学实验中心；

【摘要】 目的:构建钙整合素结合蛋白(CIB)的逆转录病毒表达载体,并建立包装细胞系。方法:质粒pet32-CIB经EcoRI和XhoI双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB,PCR及双酶切鉴定后,通过脂质体转染导入包装细胞pA317,G418稳定筛选后获得抗性克隆,NIH3T3细胞进行逆转录病毒颗粒滴度测定。结果:重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB质粒测序结果与GenBank中序列一致,经PCR及酶切鉴定证实,获得了大约574bp的基因片段,且正确插入pLXSN-CIB载体中;建立了pA317-CIB包装细胞系,采用NIH3T3细胞测定病毒滴度为6.81×105CFU/mL。结论:pLXSN-CIB结构正确,成功构建了CIB基因的逆转录病毒表达载体并建立了pLXSN-CIB包装细胞系。 更多还原

【关键词】 CIB； 载体构建； 逆转录病毒载体； pLXSN；
【基金】 国家自然科学基金资助项目(30400125);甘肃省自然科学基金资助项目(1107RJZA106)【分类号】R346

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