PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定
The adenovirus construction and identification of expression and interference of PNPLA3 gene推荐 CAJ下载 PDF下载 不支持迅雷等下载工具，请取消加速工具后下载。
【作者】 乔爱君； 方福德； 常永生；

【Author】 QIAO Ai-jun,FANG Fu-de,CHANG Yong-sheng(National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,CAMS & PUMC,Beijing 100005,China)

【机构】 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室；

【摘要】 目的构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定。方法根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV的BglⅡ和XhoⅠ位点,干扰序列克隆入pAdTrack-U6穿梭载体,PmeⅠ酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化E.coliBJ5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用PacⅠ酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率。结果测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPLA3基因过表达及干扰腺病毒载体。包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.5×1011VP/mL。以120感染复数感染小鼠肝脏原代细胞,感染效率可达到90%以上,干扰效率超过80%以上。结论成功构建了PNPLA3基因的过表达以及干扰腺病毒载体。 更多还原

【Abstract】 Objective To construct a adenovirus vector of PNPLA3 expression and interference,a gene related to metabolism of glucose and lipid and liver fatty disease.Methods The expression and interferce primers were designed according to PNPLA3 gene sequence,the sequences were cloned into pAdTrack-CMV or pAdTrack-U6 vector with Bgl Ⅱ and Xho Ⅰ restriction site.E.coli BJ5183 sensitive bacterias were cotransfected with lined vector cutted by Pme Ⅰ enzyme and adenovirus vector pAdEasy-1.The obtained recombin... 更多还原

【关键词】 PNPLA3； 过表达； 干扰； 腺病毒；
【Key words】 PNPLA3(patatin-like phospholipase domain-containing 3)； overexpression； interference； adenovirus；

【基金】 国家重点基础研究发展计划项目(973计划)(2011CB504004);;国家自然科学基金(30971079,30800389,90919019)

【文献出处】 基础医学与临床, Basic & Clinical Medicine, 编辑部邮箱 , 2011年05期 【DOI】CNKI:SUN:JCYL.0.2011-05-004 【分类号】R373
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