人4-1BBL基因重组腺病毒载体的构建及其在HEK293细胞的表达
Construction and expression of human 4-1BBL recombinant adenovirus vector in HEK293 cells推荐 CAJ下载 PDF下载 不支持迅雷等下载工具，请取消加速工具后下载。

解剖科学进展 , Progress of Anatomical Sciences,
编辑部邮箱 , 2011年05期 【作者】 杨明花； 王帅； 田昕； 王扬； 隋承光；

【Author】 YANG Ming-hua,WANG Shuai,TIAN Xin,WANG Yang,SUI Cheng-guang* (Cancer Research Institute,First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang 110001 China)

【机构】 中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所；

【摘要】 目的体外构建含有人4-1BBL基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法设计一对含有SfiI酶切位点的4-1BBL基因上下游引物,以质粒pCR4-TOPO-4-1BBL为模板,通过PCR扩增获得4-1BBL基因全序列。片段回收后经酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-EGFP-4-1BBL。经SfiI酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-CeuI和I-SceI双酶切处理,转移到pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-4-1BBL病毒质粒,PCR鉴定正确后,经HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-4-1BBL,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测目的基因人4-1BBL的表达。结果酶切鉴定和序列分析证实,重组腺病毒质粒含有人4-1BBL全长cDNA编码序列,病毒滴度为1.2×1010pfu/mL。转染HEK293细胞后荧光显微镜下观察到GFP的表达,Western blot检测可见4-1BBL蛋白的正确表达。结论人4-1BBL基因重组腺病毒载体的成功构建和在HE... 更多还原

【Abstract】 Objective To construct the recombinant adenovirus vector contained human 4-1BBL gene and to check the target gene expression in HEK293 cells. Methods Primer containing SfiI was designed and full length 4-1BBL cDNA was obtained from the pCR4-TOPO-4-1BBL plasmid by PCR, the PCR product was digested with restrictive endonucleases SfiI, then inserted directionally into pShuttle-CMV-EGFP. The plasmid of pShuttle-EGFP-4-1BBL was lined with SfiiI, the fragment containing 4-1BBL was reclaimed and then t... 更多还原
【关键词】 4-1BBL； 腺病毒； 基因表达； 共刺激分子；
【Key words】 4-1BBL； adenovirus； gene expression； costimulating molecule；
【基金】 辽宁省科技厅科学技术计划项目(2010225034)【分类号】Q782

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