李　卉1/王洪江2/陈　艳3/庞作良2/张丽萍3/李惠武1,＊

(1.新疆医科大学基础医学院科研中心，乌鲁木齐 830011；2. 新疆医科大学基础医学院生物化学教研室，乌鲁木齐 830011；3. 新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科，乌鲁木齐 830011)

Expressions and clinical correlative study of c_myc and PCNA in Hazak's esophageal cancer

LI Hui1, WANG Hong_jiang2, CHEN Yan3, PANG Zuo_liang2,ZHANG Li_ping3, LI Hui_wu1,

(1. Department of Science Research Center, Pre_clinical Medical College；2. Department of Biochemistry, Pre_clinical Medical College；3. Department of Thoracic Surgery, Affiliated Cancer Hospital, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China)

　　【摘要】 目的： 研究肿瘤相关基因c_myc和PCNA在哈萨克族食管癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法： 采用逆转录聚合酶链式反应方法(RT_PCR)检测48例哈萨克族食管癌切除标本中癌组织与远端正常组织c_myc与PCNA mRNA表达水平，并分析两者与临床病理指标的关系。结果： 癌组织中c_myc mRNA表达阳性率(79.2％)高于其远癌正常组织为(56.3％)，其差异具有统计学意义(P<0.05)；癌组织中PCNA mRNA表达阳性率(100％)高于癌远端正常组织(47.9％)，其差异具有统计学意义(P<0.05)；在临床早期病例中c_myc基因在癌组织及癌远端正常组织中的差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论： c_myc及PCNA基因的mRNA水平升高可能是哈萨克族食管癌组织中的频发事件，c_myc可能参与了哈萨克族食管癌发生的早期过程。

　　【关键词】 食管癌； c_myc； PCNA

　　中图分类号： R735.1　　　　文献标识码： A　　　　文章编号： 1004－616X(2010)06－0433－03

　　【ABSTRACT】 OBJECTIVE: To study the expressions and correlation of c_myc and  PCNA in Hazak's esophageal cancer tissues, and to investigate the relationship between their expressions and the clinical pathological features. METHODS: We investigated mRNA expressions of c_myc and PCNA in 48 Hazak's esophageal cancer specimens by RT_PCR. The relationship between clinical pathologic features and expressions of c_myc and PCNA mRNA level were analyzed. RESULTS: The positive rates of c_myc and PCNA mRNA in cancer tissues were higher than normal tissues,were 56.3％and 47.9％(P<0.05), respectively. There were significant differences in the expressions of c_myc in the clinical early stage specimens(P<0.05). CONCLUSION: The expressions of c_myc and PCNA may be related to the carcinogenesis and progression of Hazak's esophageal cancer. C_myc gene may play an important role in the early stage of Hazak's esophageal cancer.

　　【KEY WORDS】 esophageal cancer;  c_myc;  PCNA

　　食管癌是常见的十大恶性肿瘤之一,其发病率有地理区域及民族、种族差异,中国亦属于食管癌高发国家。位于中国北部的新疆哈萨克族是食管癌的高发民族,其食管癌死亡率达155.9/106,高于我国平均水平15.23/106[1]。原癌基因c_myc是myc家族的重要成员,它编码细胞核内磷酸化蛋白质。c_myc基因在维持正常细胞功能活动中起重要作用,参与细胞的增殖、分化及凋亡过程。c_myc与人类肿瘤有密切关系,在许多肿瘤组织中均可以检测到原癌基因c_myc及其蛋白表达产物的异常。PCNA是一种分子量为36 kD的酸性核蛋白,其含量与细胞的增殖状态密切相关,可作为反映肿瘤细胞增殖程度和预后判断的指标。PCNA在许多肿瘤中高表达,并随着肿瘤浸润深度增加及转移,其表达呈明显上升趋势。本研究通过检测c_myc与PCNA在哈萨克族食管癌组织及其远癌正常组织中的表达，探讨c_myc与PCNA在哈萨克族食管癌发生发展中的作用和机制。

1　材料与方法

1.1　材料

　　收集2008年1月至2009年6月间新疆肿瘤医院胸外科食管癌手术切除的新鲜组织标本48例(包括癌组织及相距6 cm以上的远端无癌正常组织)，均为鳞癌，其中男33例, 女15例。年龄37～67岁。临床分期按照国际食管癌会议制定的标准分期, 其中Ⅰ期1例，Ⅱ期17例，Ⅲ期30例，淋巴结转移31例，无淋巴结转移17例，高分化38例，低分化10例。术前均未做任何放疗和化疗，所有标本取出后做好标记，立即置入液氮中保存。

1.2　RT_PCR法及结果判定

　　总RNA提取后，紫外分光光度计检测RNA纯度(>1.6),计算出RNA浓度，取1 μg进行逆转录，然后用逆转录产物进行目的基因片段的PCR扩增。引物序列及扩增条件见表1。GAPDH用于作内对照。取扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果。用凝胶成像系统进行半定量分析，取目的基因条带和GAPDH条带强度的比值作为目的基因的相对值。

1.3　统计学方法

　　c_myc与PCNA mRNA在各组间表达差异的分析采用t检验，以α=0.05为检验水准。

2　结　果

2.1　c_myc 与PCNA mRNA的表达

　　RT_PCR结果见图1～3和表2。c_myc mRNA在48例癌组织中表达的阳性率为79.2％(38/48)，高于正常组织(56.3％)，并进行半定量分析其表达强度，其差异具有统计学意义(P<0.05)。PCNA mRNA在48例癌组织中表达的阳性率为100％(48/48)，高于正常组织(47.9％)，并进行半定量分析其表达强度，其差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.2　c_myc与PCNA mRNA的表达与临床病理指标的关系

　　将病例按照分化程度，浸润深度，淋巴结转移，临床分期分组，c_myc与PCNA基因mRNA的表达量与临床病理指标的关系见表3。由表可见，c_myc与PCNA mRNA的表达与各临床病理指标无关(P均>0.05)。

2.3　c_myc与PCNA mRNA在临床早期食管癌和食管正常组织标本中表达的比较

　　在18例临床早期病例中，比较两基因在癌组织与其远端无癌正常组织中的表达差异，发现c_myc基因表达的差异具有统计学意义(t=2.257, P<0.05)。

3　讨　论

　　哈萨克族食管癌是新疆地区特高发疾病之一，对其发病机制的探讨目前已成为研究的热点。c_myc基因定位于人染色体8q24,含3个外显子。在某种程度上，c_myc基因的转录水平反映着组织，细胞的增殖状态，增殖旺盛的组织，c_myc转录水平较高。c_myc基因对静息期细胞转入分裂周期有重要作用。许多肿瘤组织中c_myc基因表现异常[2－5]，如c_myc基因扩增，mRNA转录水平升高，这些都可促进瘤细胞的过度增殖。此外，c_myc基因还参与了细胞凋亡的过程。本研究显示c_myc 在哈萨克族食管癌组织及其正常组织中的表达差异具有统计学意义，这与李娟[6]等研究c_myc在食管癌组织中的表达率最高一致。此外，本研究显示c_myc的表达在哈萨克族食管癌癌组织及其远端无癌正常组织中存在显著性差异，这与马锴[7]等研究一致，提示c_myc的过度表达在哈萨克族食管癌的发生发展过程中具有重要作用。本研究显示c_myc在早期食管癌癌组织与正常组织中的表达差异具有统计学意义，提示c_myc基因的过度表达在哈萨克族食管癌的发生早期起到了一定作用。

　　PCNA为一种酸性核蛋白，其功能是DNA多聚酶δ的辅助因子，在DNA主链复制，修复，正常细胞周期循环中必不可少，同时 PCNA是一种细胞周期调控蛋白，含量随细胞增殖周期的不同而变化，其变化与DNA合成一致。因此，PCNA与细胞增殖有着密切关系，被作为用来评价细胞增殖，反映细胞增殖动力学的指标。本研究显示PCNA在哈萨克族食管癌癌组织及其正常组织中的表达差异具有统计学意义，这与李娜[8]等，王忠明[9]等研究结果一致。提示PCNA的高表达在哈萨克族食管癌的发生及进展过程中起到重要作用。

　　综上所述，本研究在转录水平检测了c_myc及PCNA在哈萨克族食管癌中的表达，初步证实了c_myc与PCNA在哈萨克族食管癌发生发展中所起的作用，为这一民族高发疾病的分子发病机制的阐明奠定了一定的理论基础。

参考文献

[1] 侯　浚,陈志峰,贺宇彤.食管癌的流行病学[J].河北职工医学院学报,2000,17(4):27－29.

[2] 高佃军,周　全,孙宝刚. 膀胱移行细胞癌组织Fas/Fasl和c_myc表达与肿瘤免疫逃逸相关性研究[J].中华肿瘤防治杂志，2009,16(11):863－866.

[3] 李　巍,李晶晶,李国利,等.STAT3、VEGF及C_myc在精原细胞瘤中的表达及其意义[J].中华男科学杂志,2009,15(1):26－30.

[4] 陈　丽，李　静，孙海波,等. 大肠癌组织中STAT3及其相关生长调控基因的检测与分析[J].中国老年学杂志,2009,29(6):703－705.

[5] 张　锐,刘　蓉,徐　峰. 结直肠肿瘤组织中β_catenin和c_myc的表达及其意义[J].四川医学,2009,30(7):1144－1146.

[6] 李　娟,王　沁,严　祥. 食管癌组织hTERT和c_Myc的表达[J].第四军医大学学报，2003, 24(18): 1662－1664.

[7] 马　锴,沈　毅. survivin和c_myc在食管鳞癌组织表达及其意义[J]. 齐鲁医学杂志,2006, 21(2): 106－108.

[8] 李　娜,王洪兴,张　洁. 食管鳞癌组织中FEZ1和PCNA蛋白的表达及意义[J].山东医药,2008,48(14):18－19.

[9] 王忠明，许昌韶，孙咏梅，等. 食管癌 p53、p16、PCNA蛋白表达的临床意义[J]. 中国肿瘤,2006,15(1):61－62.

收稿日期： 2010－06－28； 修订日期： 2010－10－14

基金项目： 新疆维吾尔自治区高技术研究与发展计划项目(200810103)

作者简介： 李　卉(1982－　)，女，四川人，汉族，硕士，助理研究员，研究方向：哈萨克族食管癌发病机制。

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